13 Dic
Principios Fundamentales de la Cromatografía (GC y HPLC)
Evaluación de Conceptos Clave
Falso o Verdadero: Solventes y Volatilidad en HPLC
Falso. Los solventes utilizados en HPLC no son altamente volátiles. Se prefieren solventes como agua, metanol o acetonitrilo que tienen puntos de ebullición moderados, evitando la evaporación durante la separación a alta presión.
Falso o Verdadero: Estabilidad Térmica en Cromatografía Gaseosa
Falso. Los analitos que se pueden analizar en Cromatografía Gaseosa (GC) no deben descomponerse a altas temperaturas. Los analitos deben ser volátiles y térmicamente estables. Al descomponerse a altas temperaturas, no se obtienen picos definidos, afectando la cuantificación.
Falso o Verdadero: Elución Isocrática en HPLC
Verdadero. Para separar una mezcla de analitos en HPLC se puede usar la elución isocrática. Esta utiliza una composición constante de la fase móvil y puede separar mezclas si los analitos tienen afinidades similares por la fase estacionaria.
Falso o Verdadero: Fase Móvil en Cromatografía Gaseosa
Verdadero. Para realizar un análisis en Cromatografía Gaseosa, la fase móvil es un gas. Es un gas inerte (como helio, nitrógeno o hidrógeno) que transporta los analitos por la columna.
Falso o Verdadero: Uso de Curvas de Calibración
Verdadero. Para determinar la concentración de un analito, se deben realizar curvas de calibración tanto para Cromatografía Gaseosa como para HPLC. Ambas requieren una curva de calibración con estándares de concentración conocida para cuantificar analitos en muestras desconocidas.
Falso o Verdadero: Fuerzas Intermoleculares en Separación
Verdadero. Los métodos cromatográficos utilizan las fuerzas intermoleculares para la separación analítica. La diferencia en fuerzas intermoleculares (como enlace de hidrógeno o fuerzas de Van der Waals) entre los analitos, la fase estacionaria y la fase móvil es crucial para lograr la separación.
Falso o Verdadero: Acoplamiento de Equipos Cromatográficos
Verdadero. Los equipos de cromatografía se pueden acoplar con otros equipos. Pueden acoplarse para mejorar la identificación y cuantificación de analitos, típicamente con espectrómetros de masa (GC-MS o HPLC-MS).
Falso o Verdadero: Uso de Detectores
Verdadero. En la Cromatografía Gaseosa y en HPLC se utiliza un detector. Este se utiliza para medir la señal de los analitos separados. Ejemplos: detectores de ionización de llama en GC o arreglo de diodos en HPLC.
Falso o Verdadero: Longitud de Columnas en GC
Verdadero. El largo de las columnas en Cromatografía Gaseosa puede ser más de 50 metros. Las columnas capilares pueden alcanzar longitudes superiores a 50 metros (60 o más) para una mejor resolución de mezclas complejas.
Falso o Verdadero: Forma de las Señales Cromatográficas
Falso. Las señales cromatográficas no deben ser muy anchas para lograr una mejor determinación cuantitativa. Se buscan picos estrechos y simétricos, que indican una buena eficiencia de separación. Los picos anchos pueden deberse a superposición y causar errores de cuantificación.
Falso o Verdadero: Tiempo de Retención
Verdadero. El tiempo de retención es específico para cada analito. Es característico para cada analito bajo condiciones cromatográficas constantes, permitiendo su identificación y cuantificación.
Falso o Verdadero: La Temperatura en GC
Verdadero. La temperatura es un factor crítico para la Cromatografía Gaseosa. Es crítica ya que afecta la volatilidad, la eficiencia de separación y el tiempo de retención de los analitos.
Falso o Verdadero: Naturaleza de las Interacciones en la Columna
Falso. Las fuerzas intermoleculares que se manifiestan al interior de la columna permiten separar a los analitos de una mezcla, pero no porque se formen enlaces covalentes. Las separaciones cromatográficas se basan en fuerzas intermoleculares no covalentes (como la interacción dipolo-dipolo o hidrofóbicas). Los enlaces covalentes son irreversibles y no participan en los procesos de separación.
Metodologías Cromatográficas
Procedimiento Operacional en Cromatografía Gaseosa (GC)
- Preparación de la Muestra: Incluye extracción, purificación y derivatización (si es necesaria) para hacer la muestra compatible con la técnica.
- Configuración del Equipo: Selección de la columna, ajuste del flujo de gas portador, ajuste de la temperatura del horno y definición de los parámetros del detector.
- Inyección de Muestra: Ingreso de la muestra en el sistema por jeringa o autosampler.
- Separación Cromatográfica: Los analitos se separan en la columna según su afinidad por la fase estacionaria.
- Detección: Registro de los picos mediante el detector adecuado.
- Análisis de Datos: Identificación de picos por tiempo de retención y medición de área o altura.
- Curva de Calibración: Construcción de la curva de calibración usando estándares de concentración conocida.
- Cálculo de Concentración: Determinación de la concentración del analito en la muestra.
- Validación: Verificación de la precisión y exactitud mediante control de calidad.
- Informe de Resultados.
Procedimiento de Curva de Calibración en Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia (HPLC)
- Preparación de Estándares: Creación de soluciones estándar con concentraciones conocidas.
- Configuración del HPLC: Selección de la columna, definición de la composición de la fase móvil, ajuste del flujo, temperatura y parámetros del detector.
- Inyección de Estándares: Inyección en orden aleatorio o concentración creciente para evitar errores.
- Obtención de Señales: Registro de los cromatogramas para cada estándar.
- Medición de Respuesta: Determinación del área o altura de los picos según cada estándar.
- Construcción de Curva: Gráfica de la respuesta (área o altura) versus las concentraciones.
- Análisis de Regresión: Ajuste de los datos a un modelo lineal para obtener la ecuación de la recta y el coeficiente de correlación.
- Validación de Curva: Evaluación de la linealidad, precisión, límite de detección y cuantificación.
- Aplicación: Uso de la curva de calibración para determinar la concentración de analitos en la muestra desconocida.
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