Cultivo de Bacterias: Fundamentos y Proceso

El cultivo de bacterias es el proceso de fomentar la multiplicación de microorganismos en un medio nutritivo controlado para identificarlos y estudiarlos. Esta técnica es fundamental para diagnosticar infecciones y determinar la sensibilidad a antibióticos.

Para la identificación, se emplean pruebas bioquímicas que permiten conocer el metabolismo y las características específicas de la bacteria, tales como:

• Producción de gas.
• Capacidad de utilizar manitol o azúcares.
• Producción de enzimas para degradar la lactosa.
• Características morfológicas (forma, brillo, textura).
• Tipo de metabolismo (fermentador, oxidativo o inerte).

Esquema Básico del Diagnóstico Bacteriológico

1. Cultivo Primario o Siembra Inicial

• Técnica de siembra por agotamiento.
• Obtención de cultivos mixtos y colonias.
• Estudio de características morfológicas y culturales.
• Estudio de características morfológicas y tintoriales.

2. Cultivo Secundario

• Obtención de cultivos puros y colonias aisladas.
• Técnica de siembra por agotamiento.
• Estudio de características morfológicas y culturales.
• Estudio de características morfológicas y tintoriales.

Procedimiento Clínico

El proceso inicia con la muestra clínica. En el cultivo primario (siembra inicial), se utilizan medios como el agar sangre. Si la muestra proviene de tejidos estériles (como el líquido cefalorraquídeo), se espera obtener un cultivo puro o, en su defecto, ausencia de crecimiento. Para realizar pruebas bioquímicas, es indispensable trabajar con cultivos puros y aislados.

Durante el cultivo secundario, se repica la muestra, se realiza una tinción de Gram y se evalúan características como el tamaño, color, elevación (convexa, plana), bordes y capacidad hemolítica.

Conceptos Clave

• Siembra: Acción de colocar bacterias en un medio de cultivo para su crecimiento.
• Cultivo: Obtención de microorganismos tras proporcionarles los requerimientos necesarios.
• Cultivo mixto: Contiene más de un género bacteriano.
• Cultivo puro: Contiene una sola bacteria (crecimiento confluente).
• Inóculo: Porción de la muestra que se siembra.

Técnicas de Siembra

Medios Líquidos

Se utilizan caldos (BHI, agua peptonada, nutritivo) mediante pipeta o asa bacteriológica.

Medios Sólidos y Semisólidos

• Estría continua: Utilizada en agar inclinado o para muestras de leche (dividiendo la placa en 4 cuadrantes).
• Técnica de siembra por agotamiento: Su finalidad es obtener colonias aisladas. Se divide la placa en 4 cuadrantes, siendo el cuarto el que contiene las colonias de interés.

Nota: En muestras clínicas, generalmente no se esteriliza el asa entre cuadrantes, salvo en muestras altamente contaminadas como las heces.

Pruebas Bioquímicas

Permiten determinar el metabolismo bacteriano:

Pruebas Primarias

• Catalasa: Detecta la enzima que desdobla el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno (presencia de burbujas).
• Oxidasa: Detecta la enzima citocromo oxidasa (viraje a color negro).
• Acción sobre hidratos de carbono: Determina si la bacteria es fermentadora, oxidativa o inerte mediante el uso de glucosa en condiciones de aerobiosis y anaerobiosis.
• Utilización de citratos: Evalúa si la bacteria usa citrato de sodio como fuente de carbono (viraje de verde a azul).

Pruebas Secundarias

• Ureasa: Determina la producción de la enzima ureasa (viraje de rosa pálido a fucsia).

Etiquetas: bacteriología, cultivo bacteriano, Diagnóstico Clínico, Microbiología, pruebas bioquímicas, siembra por agotamiento